EVO视讯的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书详细介绍了细胞培养的条件和步骤，为科研人员提供了清晰易懂的操作指南，以确保细胞的健康生长和有效实验结果。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁、悬浮混合生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议按1:2比例传代，传代后每2天更换培养基液。

备注：对于悬浮细胞，需离心收集；贴壁细胞则应采用贴壁处理方法，用无菌离心管收集培养基留作后续处理。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应待细胞状态良好后灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精消毒细胞瓶，放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行后续处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。如未提供照片，则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞汇合度未超过80%的情况下，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，预留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱继续培养。若细胞密度超过80%，可进行传代：对于贴壁细胞，按照以下方法进行：

1. 弃去培养上清，用无钙、无镁PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，则迅速加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移到15ml离心管中，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗。

2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

3. 弃去上清液，沉淀细胞加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后移至冻存管中。

4. 冻存后的细胞应直接置于-80℃冰箱，若后期转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，彻底溶解后用75%酒精擦拭管壁。

2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

3. 弃去上清液，重悬于5ml完全培养基后接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；次日更换新鲜完全培养基。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能因粘附不牢而脱落，为正常现象。如脱落严重，则要将培养液收集至离心管，进行相应处理和传代。EVO视讯建议按照常规操作规程确保细胞的正常生长。

五、售后条款

对于细胞出现的问题，EVO视讯规定了重发与否的标准，具体情况需进行核实。如果细胞在运输过程中遭遇损坏或污染，客户需在收到产品后的规定时间内提供真实有效的实验结果和照片，以便进行判断。对于因客户操作不当导致的细胞问题，EVO视讯将不予重发。